전체 글29 Western blot 10X running buffer 조성 Western blot을 위한 running buffer Western blot을 수행하기 위해서는 running buffer가 필요합니다. 실험 조건에 따라 일부 달라지겠으나 SDS-PAGE를 수행한다고 할 때 running buffer를 어떻게 만들어야 하는지 알아보도록 하겠습니다. Running buffer는 WB을 자주 한다면 매번 만들어서 사용하기 번거로우므로 10X stock으로 만들어서 사용합니다. 10X running buffer 조성 시약 분자량 넣는 양 10X stock 농도 1X working 농도 Tris base 121.14 30.3g 0.25M 0.025M Glycine 75.07 144g 1.92M 0.192M SDS 288.38 10g 1% 0.1% DW Up to 1L 제조.. 2022. 11. 14. 몰농도 계산하기 몰농도의 정의 몰농도 (M, Molarity)는 용액 1L 속에 들어있는 용질의 몰(mole)을 나타낸 농도 단위입니다. 생물학 실험에서 가장 빈번하게 사용하는 농도 단위 중 하나로 정확한 개념을 숙지하고 계셔야 각종 버퍼를 제조하고 실험하는데에 문제가 없습니다. 몰농도 계산하기 몰농도의 계산을 위해서는 분자량(MW)을 알고 있어야 합니다. MW란 원자들의 원자량 총 합을 의미합니다. 쉽게 예를 들어 설명하기 위해 NaCl을 예로 설명해 보도록 하겠습니다. NaCl에는 Na원자 1개와 Cl원자 1개로 이루어져 있습니다. 그래서 NaCl의 MW를 계산해보면 [Na(22.99g/mol) + Cl(35.45g/mol) = 58.44g/mol]의 계산식을 통해 58.44가 됩니다. 이렇게 NaCl의 MW(58... 2022. 11. 13. Agarose gel 만들기 Agarose gel의 용도 DNA나 RNA를 전기영동하여 확인하거나 다음 실험을 위해 회수하고자 할 때 주로 사용됩니다. Agarose gel을 이용한 gel 전기영동법을 진행하고자 한다면 Agarose gel이 필요합니다. Agarose gel의 재료 Agarose TAE버퍼(조성은 여기로) 또는 TBE버퍼(조성은 여기로) EtBr 또는 EtBr 대체시약 Gel 틀과 comb 전자레인지 Agarose gel의 농도 Agarose gel은 통상 0.8%~2% 내외로 제작합니다. 0.8%와같이 낮은 농도의 gel로 만들수록 큰 사이즈의 DNA 분리에 적합합니다. 2%에 가까운 높은 농도의 gel일수록 100-200bp 정도의 낮은 사이즈의 DNA 분리에 적합한 gel이 됩니다. 낮은 농도의 gel은 굳었.. 2022. 11. 10. TBE 버퍼의 조성 TBE 버퍼의 특징 TBE 버퍼는 Agarose gel 전기영동시 주로 사용합니다. Agarose gel 전기영동은 TAE 버퍼나 TBE 버퍼를 사용합니다. TAE 버퍼의 조성은 여기에서 확인하세요. TBE 버퍼는 Tris, Boric acid, EDTA로 이루어진 버퍼로, 각 재료의 앞글자를 따서 명명한 버퍼입니다. TAE 버퍼에서 Acetic acid 대신 Boric acid가 들어갔다고 생각하면 됩니다. TBE 버퍼는 TAE 버퍼와 마찬가지로 고농도의 stock solution을 만들어 놓았다가 희석해서 사용합니다. 차이점은 TAE는 50X로 제작하여 1X로 희석해서 사용했다면 TBE는 5X로 제작하여 0.5X로 사용하는 것이 일반적입니다. TBE 버퍼의 조성 재료 5X 기준 넣는양(1L) 5X s.. 2022. 11. 10. TAE 버퍼 조성 TAE 버퍼의 사용 TAE 버퍼는 Agarose gel 전기영동에 사용됩니다. TAE는 Tris, Acetic aicd, EDTA로 구성되어 있으며 각각의 앞글자를 따서 붙인 이름입니다. 전기영동에서는 TBE 버퍼도 많이 사용됩니다. Acetic acid 대신 Boric acid를 넣은 것이 TBE 버퍼입니다. TBE 버퍼의 조성은 여기를 참조해 주세요. 전기영동시에 gel 제작 뿐만아니라 전기영동 탱크에도 채워서 사용하는 버퍼로 사용량이 많아 1X로 만들지 않고 고농도의 stock solution으로 제작한 뒤 희석해서 사용하는 것이 일반적입니다. TAE 버퍼의 조성 재료 50X 기준 넣는양(1L) 50X stock 농도 1X working 농도 Tris 242g 2M 40mM Acetic acid 5.. 2022. 11. 10. 파이펫(피펫)의 정확한 사용 가이드 파이펫팅(피펫팅)의 기본과 종류 분자생물학 연구를 이제 막 수행하기 시작한 분들이라면 오늘의 포스팅을 조금 유심히 살펴보시는 것이 큰 도움이 되실 것입니다. 파이펫(피펫이라고도 부르며 이후 글에서는 파이펫이라고 통일해서 부르겠습니다)은 분자생물학 연구자에게는 앞으로 핸드폰만큼 자주 만지고 사용하게 될 가장 중요한 장비입니다. 공용 공간에서 공용 파이펫을 사용하는 경우도 있겠으나, 이 외 개인 실험대 공간에서는 필히 자신의 파이펫을 구비하고 사용하시기 바랍니다. 같은 제조사의 파이펫이라도 누가 어떻게 사용하고 관리했는지에 따라 정확도와 손 끝 감각이 천차만별이기 때문에 각자가 자기 파이펫을 이용하고 관리하는 습관이 필요합니다. 분자생물학 연구에서 파이펫의 관리와 올바른 파이펫팅 방법의 숙지가 중요한 이유는.. 2022. 9. 16. 이전 1 2 3 4 5 다음
