프로토콜7 RT(Reverse transcription) 프로토콜 RT(Reverse transcription)란 무엇인가 RT는 Reverse transcription으로, RNA로부터 cDNA를 만들어내는 과정을 말합니다. 우리가 COVID-19의 PCR 검사를 수행한다고 하는 것들도 RNA virus이기 때문에 RT-PCR로 증폭해서 확인하는 검사방법이 되는 것입니다. 자세한 추가 내용은 아래 글에서도 확인해 보세요. 2022.09.07 - [생물학정보] - RT-PCR이란 어떤 기술인가 RT-PCR이란 어떤 기술인가 RT-PCR의 정의 코로나 시대를 지나오면서 일반 사람들에게 PCR이라는 용어가 익숙해졌습니다. PCR이란 지난번 포스팅에서 소개해드린 것처럼 Polymerase chain reaction입니다. 그 원리는 DNA를 프라이머를 innosyn.co.k.. 2022. 11. 22. Transfer buffer의 조성 Transfer buffer의 특징 Transfer buffer는 western blot 과정에서 SDS-PAGE 후에 진행하는 과정으로, Gel 상에 전개되어 있는 단백질을 membrane으로 옮겨주는 과정입니다. 일반적으로 사용하는 buffer는 Tris-Glycine buffer입니다. SDS-PAGE용 running buffer(조성은 여기에서 확인하실 수 있습니다)와 마찬가지로 자주 사용하는 경우 매번 1X solution을 제조하기 번거로우므로 10X~20X 정도의 stock solution을 만들어서 사용하게 됩니다. 10X Transfer buffer의 제작 재료 분자량 넣는 양 10X stock 농도 1X working 농도 Tris base 121.14 30.3g 0.25M 0.025M.. 2022. 11. 14. Western blot 10X running buffer 조성 Western blot을 위한 running buffer Western blot을 수행하기 위해서는 running buffer가 필요합니다. 실험 조건에 따라 일부 달라지겠으나 SDS-PAGE를 수행한다고 할 때 running buffer를 어떻게 만들어야 하는지 알아보도록 하겠습니다. Running buffer는 WB을 자주 한다면 매번 만들어서 사용하기 번거로우므로 10X stock으로 만들어서 사용합니다. 10X running buffer 조성 시약 분자량 넣는 양 10X stock 농도 1X working 농도 Tris base 121.14 30.3g 0.25M 0.025M Glycine 75.07 144g 1.92M 0.192M SDS 288.38 10g 1% 0.1% DW Up to 1L 제조.. 2022. 11. 14. 몰농도 계산하기 몰농도의 정의 몰농도 (M, Molarity)는 용액 1L 속에 들어있는 용질의 몰(mole)을 나타낸 농도 단위입니다. 생물학 실험에서 가장 빈번하게 사용하는 농도 단위 중 하나로 정확한 개념을 숙지하고 계셔야 각종 버퍼를 제조하고 실험하는데에 문제가 없습니다. 몰농도 계산하기 몰농도의 계산을 위해서는 분자량(MW)을 알고 있어야 합니다. MW란 원자들의 원자량 총 합을 의미합니다. 쉽게 예를 들어 설명하기 위해 NaCl을 예로 설명해 보도록 하겠습니다. NaCl에는 Na원자 1개와 Cl원자 1개로 이루어져 있습니다. 그래서 NaCl의 MW를 계산해보면 [Na(22.99g/mol) + Cl(35.45g/mol) = 58.44g/mol]의 계산식을 통해 58.44가 됩니다. 이렇게 NaCl의 MW(58... 2022. 11. 13. Agarose gel 만들기 Agarose gel의 용도 DNA나 RNA를 전기영동하여 확인하거나 다음 실험을 위해 회수하고자 할 때 주로 사용됩니다. Agarose gel을 이용한 gel 전기영동법을 진행하고자 한다면 Agarose gel이 필요합니다. Agarose gel의 재료 Agarose TAE버퍼(조성은 여기로) 또는 TBE버퍼(조성은 여기로) EtBr 또는 EtBr 대체시약 Gel 틀과 comb 전자레인지 Agarose gel의 농도 Agarose gel은 통상 0.8%~2% 내외로 제작합니다. 0.8%와같이 낮은 농도의 gel로 만들수록 큰 사이즈의 DNA 분리에 적합합니다. 2%에 가까운 높은 농도의 gel일수록 100-200bp 정도의 낮은 사이즈의 DNA 분리에 적합한 gel이 됩니다. 낮은 농도의 gel은 굳었.. 2022. 11. 10. TBE 버퍼의 조성 TBE 버퍼의 특징 TBE 버퍼는 Agarose gel 전기영동시 주로 사용합니다. Agarose gel 전기영동은 TAE 버퍼나 TBE 버퍼를 사용합니다. TAE 버퍼의 조성은 여기에서 확인하세요. TBE 버퍼는 Tris, Boric acid, EDTA로 이루어진 버퍼로, 각 재료의 앞글자를 따서 명명한 버퍼입니다. TAE 버퍼에서 Acetic acid 대신 Boric acid가 들어갔다고 생각하면 됩니다. TBE 버퍼는 TAE 버퍼와 마찬가지로 고농도의 stock solution을 만들어 놓았다가 희석해서 사용합니다. 차이점은 TAE는 50X로 제작하여 1X로 희석해서 사용했다면 TBE는 5X로 제작하여 0.5X로 사용하는 것이 일반적입니다. TBE 버퍼의 조성 재료 5X 기준 넣는양(1L) 5X s.. 2022. 11. 10. 이전 1 2 다음
