Western blot을 위한 running buffer
Western blot을 수행하기 위해서는 running buffer가 필요합니다. 실험 조건에 따라 일부 달라지겠으나 SDS-PAGE를 수행한다고 할 때 running buffer를 어떻게 만들어야 하는지 알아보도록 하겠습니다. Running buffer는 WB을 자주 한다면 매번 만들어서 사용하기 번거로우므로 10X stock으로 만들어서 사용합니다.
10X running buffer 조성
| 시약 | 분자량 | 넣는 양 | 10X stock 농도 | 1X working 농도 |
| Tris base | 121.14 | 30.3g | 0.25M | 0.025M |
| Glycine | 75.07 | 144g | 1.92M | 0.192M |
| SDS | 288.38 | 10g | 1% | 0.1% |
| DW | Up to 1L |
제조 및 사용시 주의사항
- SDS가 들어있어 거품이 많이 나기 때문에 1X로 희석해서 사용할 시 주의합니다.
- Tris의 경우 실험실에서 사용하는 시약이 Tris base로 MW이 121.14가 맞는지 확인 후 위와 같이 만들어야 합니다. 만약 Tris-HCl 등의 시약을 갖고 있다면 MW이 다르기 때문에 10X stock의 농도에 맞게 넣는 양을 다시 계산하시기 바랍니다. MW에 대한 자세한 설명은 여기를 참조하세요.
댓글