Transfer buffer의 특징
Transfer buffer는 western blot 과정에서 SDS-PAGE 후에 진행하는 과정으로, Gel 상에 전개되어 있는 단백질을 membrane으로 옮겨주는 과정입니다. 일반적으로 사용하는 buffer는 Tris-Glycine buffer입니다. SDS-PAGE용 running buffer(조성은 여기에서 확인하실 수 있습니다)와 마찬가지로 자주 사용하는 경우 매번 1X solution을 제조하기 번거로우므로 10X~20X 정도의 stock solution을 만들어서 사용하게 됩니다.
10X Transfer buffer의 제작
| 재료 | 분자량 | 넣는 양 | 10X stock 농도 | 1X working 농도 |
| Tris base | 121.14 | 30.3g | 0.25M | 0.025M |
| Glycine | 75.07 | 144g | 1.92M | 0.192M |
| DW | Up to 1L |
1X Transfer buffer의 제작
10X transfer buffer를 만들어 놓았다면, 1X로 dilution할 때는 아래와 같이 buffer를 제작합니다.
- 100ml의 10X transfer buffer
- 200ml의 Methanol
- 700ml의 DW
이렇게 제작한 후 차갑게 냉장하여 buffer를 보관하였다가 사용하면 됩니다.
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